贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）的发酵工艺流程一般分为菌种活化与种子制备、发酵培养、后处理三大阶段，以下为典型液体深层发酵流程

一、菌种活化与种子制备

从沙土管或-80℃甘油管中无菌取出菌种，接入LB琼脂斜面，25~37℃培养3~7天使其活化。随后进行逐级扩大：将斜面孢子制成悬浮液，接种至含10~50 mL LB液体培养基的三角瓶中，33~37℃、180~200 rpm振荡培养12~24 h，获得一级种子；再以1%~5%接种量转入装有1~10 kg培养基的种子罐，相同条件培养12~24 h，获得二级种子。种子要求菌浓度达10⁷~10⁹ CFU/mL，无杂菌污染。

二、发酵培养

培养基常用LB、NB或优化配方（如葡萄糖19.4 g/L、NH₄Cl 1.9 g/L、KH₂PO₄ 9.0 g/L、谷氨酸钠6.0 g/L、MgSO₄ 1.75 g/L等）。以5%~10%接种量将种子接入发酵罐（装液量60%~70%），初始pH调至6.5~7.2。典型发酵条件：温度25~37℃，转速120~200 rpm，通气量1~1.2 vvm，培养24~96 h。过程中通过补酸控制pH在6.5~7.0，并注意消泡处理。优化后活菌数可达10¹⁰ CFU/mL以上。

三、后处理

发酵结束后，4℃、5000~10000 rpm离心10~20 min收集菌体。若需脂肽等代谢产物，将上清液调pH至2.0酸沉12 h，再经甲醇萃取、过滤获得粗提液。若制备菌粉，将菌泥与保护剂（脱脂乳+甘油+蔗糖）混合，-20℃预冻后真空冷冻干燥22~24 h，水分降至2.5%~3%，得干粉菌剂，活菌含量可达10¹² CFU/g。

整个流程需严格无菌操作，关键控制点为种子活力、发酵pH与溶氧，不同菌株*优参数需通过响应面法等进一步优化。